Теперь самый важный этап – посев.
Сеять решила в среду Кнудсона «С». Ее состав следующий (в мг-литр):
Са(NО3)2* 4Н20-1;
КН2Р04-025;
MgSO4 * 7Н2O - 0,25;
FeSO4 o 7Н2О - 0,025;
(NH4)2SO4 - 0,50;
MnSO4 * 4Н2О - 0,0075;
глюкоза или сахароза - 20; (обычный сахар)
агар-агар - 15;
вода – 1000
растительный компонент – 7
Все реактивы заказала через интернет у компании Олхим из Харькова http://www.allhim.com.ua/. (самыми маленькими обьемами, по 200-300 гр). Огромное спасибо Беде (Тане), которая помогла мне их забрать и доставила в Киев. Баночки для посева мне подогнала Бузилка (Жанна) – огромное спасибо!-от детского питания по 250 гр. Кирдон (Оксана) отдолжила мне весы (1966 года выпуска, с чашечками) с точностью до 0,01 гр – спасибо огроменное!
Итак, 13 июня мы вместе с мужем начали процесс)) Решили варить среду из 0,5 литров воды (все на половину). Отмерили 150 гр воды и развели агар. Пока он набухал, отмеряли все остальные компоненты среды в оставшуюся воду по списку. В качестве растительного компонента был выбран кисленький помидор. Агар набухал в течении 1,5 часов. Затем слили все вместе. За неимением скороварки, среду решили стерилизовать дробной пастеризацией. Поставили на водяную баню и нагревали до 70 градусов в течении 30 минут. Прокипятив крышку, плотно закрыли банку, вынули из кастрюльки и оставили до завтра. Вечером следующего дня повторили процедуру и все споры грибов, которые успели прорости за ночь – были убиты. Банки, в которые проводили посев, стерилизовали, плотно завернув в фольгу, в духовке, час при температуре 200 градусов. Пинцет (которым брали крышки и инструмент из кипятка) прокипятили положили в пиалочку со спиртом. Нож (разрезать плод), ложечку чайную (набирать среду), шпатель-ложечку (набирать семена), крышки от банок - кипятили. Весь посев проводили на решетке над кастрюлями с кипящей водой (над восходящим паром) очень быстро. Сначала, растопив среду на водяной бане, ложечкой залили ее в баночки слоем 2 см и закрыли баночки крышками. Затем, протерев плод спиртом, разрезали его ножом (нож прокипятить и перед самым разрезанием обжечь) и шпатель-ложечкой взяв немного семян (их так просто не посеешь, они как мягкая вата) распределили по поверхности среды. Быстро закрыли крышки. Все проводили в марлевых повязках и резиновых перчатках (протертых спиртом). Смешно капец))) Прошло 3 дня и чистыми без плесени осталось только 2 баночки. В конечном итоге чистых баночек не осталось. Вот такая петрушка.
Ответить с цитированием